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產(chǎn)品中心

小鼠總膠原蛋白(Collagen)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

產(chǎn)品型號:

產(chǎn)品產(chǎn)地:江蘇南京

采購熱度:1410

簡介內(nèi)容:

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 本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中總膠原蛋白(Collagen含量。 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本小鼠總膠原蛋白(Collagen水平。用純化的小鼠總膠原蛋白(Collagen抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總膠原蛋白(Collagen,再與HRP標(biāo)記的總膠原蛋白(Collagen抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總膠原蛋白(Collagen呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠總膠原蛋白(Collagen濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:90μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為60μg/L 40μg/L,20μg/L10μg/L, 5μg/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項:

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間*好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,*好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物請避光保存。

7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。


計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),    

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD      

值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋      

倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)      

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                  

  

                                              

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%11%

 

檢測范圍:                                              

2μg/L 80μg/L

                                       

                            

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:;2-8。

2.有效期:6個月

 

 

 

 

標(biāo)簽:試劑盒 

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使用產(chǎn)品:Human MDA ELISA kit
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使用產(chǎn)品:Human IL-1β, TNF-α ELISA kit
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作者單位:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
使用產(chǎn)品:Rat NF-KB ELISA kit
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使用產(chǎn)品:Rat GAG ELISA kit
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作者單位:新疆醫(yī)科大學(xué)
使用產(chǎn)品:Mouse IL-2, IL-1β, TNF-α ELISA kit
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作者單位:中國藥科大學(xué)
使用產(chǎn)品:Mouse ICAM-1 (sICAM-1), VCAM-1 (sVCAM-1) ELISA kit
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作者單位:上海市人民醫(yī)院
使用產(chǎn)品:Rabbit anti-oxidized LDL (ox-LDL) antibody ELISA kit
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作者單位:華南大學(xué)第一附屬醫(yī)院
使用產(chǎn)品:Rat UP ELISA kit
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使用產(chǎn)品:Mouse Insulin, FFA ELISA kit
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作者單位:揚州大學(xué)
使用產(chǎn)品:Chicken IFN-β ELISA kit
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使用產(chǎn)品:Rat α- glucosidase ELISA kit
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使用產(chǎn)品:Mouse microalbuminuria ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Mouse nitric oxide, IL-8, MCP-1, ROS, TNFR ELISA kit
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作者單位:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
使用產(chǎn)品:Mouse IL-1β, IL-6, TNF-α, NO ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Mouse TNF-α, IL-6, and IL-1β ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Mouse IL-1β, IL-18, TNF-α ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Rat apoB48 ELISA Kit
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使用產(chǎn)品: Rat CS, IL-1β, TNF-α ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Plant LAP ELISA Kit
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使用產(chǎn)品:Plant AHL ELISA Kit
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作者單位:河海大學(xué)
使用產(chǎn)品:Plant ATP, DHA ELISA Kit
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作者單位:江南大學(xué)
使用產(chǎn)品:Mouse CRP, LPS ELISA Kit

常見問答

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4、簽定合同: 擬定合同,雙方簽字蓋章確認(rèn),請注意產(chǎn)品的報價有效期,務(wù)必在有效期內(nèi)處理。

5、確認(rèn)付款:付款后,請您將付款底單提供給我司,以便及時確認(rèn)到帳為您發(fā)貨。對于非款到發(fā)貨客戶,直接進(jìn)入下一步安排發(fā)貨。

6、發(fā)貨配送:一般采用快遞和物流發(fā)貨。按客戶訂貨產(chǎn)品特殊性和數(shù)量及收貨地來定。南京本地客戶可享受送貨上門服務(wù)。

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